PCR扩增时Mg离子多时易出现杂带的原因可能有以下几点:
引物特异性不高:当引物特异性不高时,它们会在模板DNA序列的非特异位点上进行延伸,导致非特异的扩增和杂带的出现。
循环次数过多:循环次数过多可能导致过度扩增和杂带的出现。
酶的质量不好:PCR酶的质量不好或不恰当使用量也会导致PCR扩增过程中出现杂带。
退火温度过低:退火温度过低可能导致引物与模板DNA的结合不充分,从而导致非特异结合和杂带的出现。
样品处理不当:未正确处理样品,如未能有效去除外源DNA污染,也可能导致杂带的出现。
Mg2+浓度偏高:Mg2+浓度偏高可能导致非特异扩增和杂带的出现。
PCR试剂盒质量不好:使用质量不好的PCR试剂盒也可能导致PCR扩增时出现杂带。