bl21表达步骤

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推荐答案

2023-10-23 17:32:06

BL21是一种常用的大肠杆菌表达宿主菌株,下面是一般的BL21表达步骤:

1. 转化:将目标表达质粒(含有目标基因)转化到BL21细胞中。这可以通过热冲击法或电穿孔法等方法进行。

2. 选择:在LB琼脂平板上培养转化后的细胞,并添加适当浓度的抗生素,如氨苄青霉素或卡那霉素。只有带有目标质粒并成功转化的细胞才能生存下来。

3. 培养预培养液:挑取正选出来的单个菌落,接种到小量LB培养基中,并在摇床上以适当条件进行预培养。此步骤旨在使菌体适应液体培养条件。

4. 大规模培养:将经过预培养的菌液接种到含有适当抗生素和诱导剂(如IPTG)的大规模培养基中,并在恰当温度和搅拌速率下进行。

5. 收获细胞:待菌体得到足够生长后,通过离心分离细胞和培养基。

6. 细胞裂解:使用适当的细胞裂解方法(如超声波、高压处理或化学裂解剂等)将细胞破碎,以释放目标蛋白质。

7. 提取和纯化目标蛋白:通过离心、过滤和柱层析等技术,将目标蛋白从混合物中分离出来,并得到较纯的表达产物。

这些步骤提供了一般性的BL21表达流程。请注意,具体操作步骤可能会因实验需求、目标蛋白特性和实验室惯例而有所不同。在进行实验之前,请参考相关文献、手册或向经验丰富的研究人员咨询以获取准确而详细的步骤指南。

其他答案

2023-10-23 17:32:06

BL21是一种常用的大肠杆菌表达菌株,以下是一般的BL21表达蛋白的步骤:

1. 分别准备含有目标基因的质粒DNA和大肠杆菌BL21菌株。

2. 将质粒DNA与BL21菌株进行转化。可以使用热激转法、电穿孔法等方法将质粒DNA引入细菌中。

3. 将转化后的菌液均匀涂布在含有适当抗生素的琼脂培养基板上,并在37摄氏度静置孵育过夜。

4. 从培养基上挑取单个菌落,接种到含有适当抗生素的液体培养基中,加入适量的抗生素以选择出含有目标基因的菌株。

5. 在摇床上以适当温度和速度进行预培养,让菌液恢复至对应条件下的生长状态。

6. 添加诱导剂,如IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)来诱导目标基因的表达。注意控制诱导时间和诱导剂的浓度。

7. 继续培养一段时间,通常是几小时到过夜,以允许目标蛋白的表达。

8. 收集细菌培养物,通过离心将细菌沉淀下来。

9. 去除上清液,保留沉淀物。

10. 使用适当的提取方法(如超声波破碎法、界面活性剂裂解法等)对细菌沉淀物进行蛋白提取。

11. 将提取的蛋白样品进行分析,如SDS-PAGE电泳和Western blot检测,以确认目标蛋白的表达与纯度。

其他答案

2023-10-23 17:32:06

首先JM109是克隆菌株,BL21是表达菌株。如果你不需要表达的话当如不需要转入BL21。做表达的话,先转入JM109有两个原因:一、JM109比BL21转化效率要高二、BL21作为表达菌株,质粒稳定性不如JM109

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