BL21是一种常用的大肠杆菌表达宿主菌株,下面是一般的BL21表达步骤:
1. 转化:将目标表达质粒(含有目标基因)转化到BL21细胞中。这可以通过热冲击法或电穿孔法等方法进行。
2. 选择:在LB琼脂平板上培养转化后的细胞,并添加适当浓度的抗生素,如氨苄青霉素或卡那霉素。只有带有目标质粒并成功转化的细胞才能生存下来。
3. 培养预培养液:挑取正选出来的单个菌落,接种到小量LB培养基中,并在摇床上以适当条件进行预培养。此步骤旨在使菌体适应液体培养条件。
4. 大规模培养:将经过预培养的菌液接种到含有适当抗生素和诱导剂(如IPTG)的大规模培养基中,并在恰当温度和搅拌速率下进行。
5. 收获细胞:待菌体得到足够生长后,通过离心分离细胞和培养基。
6. 细胞裂解:使用适当的细胞裂解方法(如超声波、高压处理或化学裂解剂等)将细胞破碎,以释放目标蛋白质。
7. 提取和纯化目标蛋白:通过离心、过滤和柱层析等技术,将目标蛋白从混合物中分离出来,并得到较纯的表达产物。
这些步骤提供了一般性的BL21表达流程。请注意,具体操作步骤可能会因实验需求、目标蛋白特性和实验室惯例而有所不同。在进行实验之前,请参考相关文献、手册或向经验丰富的研究人员咨询以获取准确而详细的步骤指南。