最大浓度x对应体积再➗最小浓度就是最大浓度对应的体积，然后总体积再减去当前体积，等于需要稀释的体积。
1.平均值是复孔1和复孔2的总和除以2；
2.将算出的OD平均值（x）代入y=1196.1x-179.87，计算出样品孔的浓度（y）；
3.如果在测OD值时，样品孔的OD值大于A孔的OD值，就说明样品孔的浓度偏大（不能代入公式计算浓度），需要成倍稀释后再次测OD值，直到测得的样品OD值在I-A范围之间，即可代入公式计算浓度。根据经验，4°离心后的上清液颜色如果偏黄，蛋白浓度一般很大，需要稀释，蛋清色的上清会比偏黄色的上清浓度略低，所以建议加到96孔板里的蛋白上清液最好稀释一定比例，避免返工。这一步适用于加了稀释液、浓度偏大的样品，在得出y的基础上乘以稀释倍数，得到蛋白的真正浓度；
4.因为标准品的浓度单位是ug/ml，而后面的上样体积单位为ul，所以换算成ug/ul；
5.上样时不单单是蛋白上清液，还要加入成比例的上样缓冲液，这里以5X上样缓冲液为例（4ul的蛋白上清配1ul的上样缓冲液，4:1的关系），所以这一步的上样浓度就变成：蛋白浓度（ug/ul）乘以0.8；
6.上样的总量是一定的，可以是30ug，也可以是50ug，这个值可以通过曝光后条带的颜色深浅来改变总量的多少。上样体积就是上样总量÷上样浓度，这样就算出来每组样品需要加多少ul的上样体积跑胶啦。还有一点要注意的是，如果样品的浓度很低，测出来的体积就会大，因为一个梳子孔最多能注入25ul，尽量不要超过20ul为好，否则跑出来效果不佳。
