1、温度。 猴头菇是中温型和变温结实性真菌。菌丝体生长和子实体形成要求温度不同，前者相对高于后者。菌丝体生长温度范围为6℃～33℃，最适温度为24℃～26℃。低于16℃或高于30℃菌丝体生长缓慢，低于6℃或高于35℃菌丝体停止生长。
子实体生长温度范围为12～24℃，最适宜温度15℃～20℃，超过25℃子实体生长受到抑制，低于16℃子实体变成微红色，生长缓慢。温度偏高时，子实体生长很快，但个体较小，菌刺长；温度偏低，子实体较大，菌刺短，品质好。经袋料栽培和人工定向培育后，子实体形成和生长的温度幅度更广，适应性更强。
2、湿度。水分是猴头菇的主要组成成分，鲜菌丝体和鲜子实体中，水分含量达80～90%。水分是猴头菇生长的必要条件。猴头菌细胞的一切生化反应，都是在水的参与下进行的。营养成分的吸收和运输，酶的分泌，纤维素、木质素等复杂物质的分解利用，都必须在一定的水分条件下才能进行。但是，水分过多了又会影响培养基内空气流通，致使菌丝呼吸困难无法生长；还会降低菌丝抗逆能力，并加速其衰老。
木屑培养基较紧密，要求含水量低些；棉子皮等较疏松的培养基，要求较高的含水量。 栽培猴头菇，用木屑等较紧密的培养基，含水量以55%～60%为宜；甘蔗渣培养基含水量以65%～75%为宜。测定猴头菇培养基（料）的含水量是否合适，用手握法即可。即用手抓起一把调好的培养料紧握，指缝间有水渗出不往下掉，便是正好，挤不出水来，是太干；一挤有水滴往下掉，是太湿。
3、空气相对湿度对猴头菇的生长发育有很大影响。猴头菇在不同的生长发育阶段，对空气相对湿度的要求不同。菌丝体生长阶段，培养室内空气相对湿度保持60%左右即可。子实体形成阶段，培养室（菇房、菇棚）内的空气相对湿度要求到85%～90%。在这样适宜的湿度条件下，子实体生长迅速，菇体洁白。
若湿度低到70%，由于猴头菇子实体表面没有角质、革质或蜡质等保护组织，是裸露状肉质快，很快即因散失水分颜色变黄，菌刺变短，生长变慢或停止，致使产量降低。特别是幼嫩子实体，湿度低时还会留下不能恢复的永久性斑痕。反之，湿度超过95%时，又会因通气不良而使子实体畸形，多数表现为菌刺粗，球块小，分枝状，严重时不形成球块，产生担孢子多，味苦，抗逆性大大降低，易染病害。 猴头菇是一种好气性真菌。在生长发育过程中，需要不断吸收氧气，呼出二氧化碳，进行呼吸作用，产生能量，供猴头菇生长发育需要。
由于二氧化碳对呼吸作用有抑制作用，若二氧化碳含量过高，则生长受抑制；而二氧化碳含量低时，虽然呼吸作用旺盛，生长迅速，但是菌丝易老化。 在菌丝体生长阶段，猴头菇能忍受较高的二氧化碳浓度，可以在含二氧化碳0.3%～1%的空气中正常生长。 在子实体阶段，猴头菇对二氧化碳浓度十分敏感。通气不良或空气中二氧化碳含量高时，对原基分化和子实体生长都有很大影响。在子实体生长过程中，空气中二氧化碳的含量以不超过0.1%为宜。菇棚中的二氧化碳浓度超过0.1%时，就会刺激菌柄不断分枝，菌刺扭曲，球心发育不良，形成畸形子实体。
所以，猴头菇培养室每天定时通风换气，以排除过多的二氧化碳和其他代谢废气，补充新鲜空气。
4、光线 猴头菇没有叶绿素，不能进行光合作用，不需要直射光线。如果将其培养在直射阳光下，一方面由于阳光中的紫外线会伤害它，另一方面由于水分急剧蒸发，又会使菌体很快干萎。菌丝体生长阶段不需要光线。子实体生长过程中需散射光，在200～400勒克斯的光照条件下，子实体才能生长得洁白，但如果光照超过1000勒克斯，子实体发红，生长缓慢，品质变差。
5、酸碱度 猴头菇是比较喜欢酸性的一种真菌，这也是它的一个特点。在平常栽培的几种食用菌中，猴头菇需要的pH最低。只有在酸性条件下，猴头菇才能很好地分解培养基中的有机物质。猴头菇的菌丝体，在pH值2.4～8.5的范围内均能生长。pH3.5～5.5最好，不但菌丝好，而且利于子实体原基形成和提高产量。根据培养料经灭菌后pH值下降0.5左右的特点，拌料后的pH值最好为6.0左右。
