分段盐析

盐析是指向蛋白质溶液中加入高浓度的中性盐，以破坏蛋白质的胶体稳定性，使蛋白质的溶解度降低而从溶液中沉淀析出的过程。改变盐的浓度与溶液的pH值，便可将混合液中的蛋白质逐个盐析分开，这种分离蛋白质的操作称为分段盐析。如：血清球蛋白（50%(NH₄)₂SO₄饱和度），清蛋白（饱和(NH₄)₂SO₄)。

分段盐析介绍

盐析是指向蛋白质溶液中加入高浓度的中性盐，以破坏蛋白质的胶体稳定性，使蛋白质的溶解度降低而从溶液中沉淀析出的过程。改变盐的浓度与溶液的pH值，便可将混合液中的蛋白质逐个盐析分开，这种分离蛋白质的操作称为分段盐析。如：血清球蛋白（50%(NH₄)₂SO₄饱和度），清蛋白（饱和(NH₄)₂SO₄)。

分段盐析盐析方法

对分离目的蛋白的盐析，最好采用分段盐析。由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同，沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同，改变盐的浓度与溶液的pH值，可将混合液中的蛋白质分批盐析分开，这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法(fractional saltingout)。如半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白，饱和硫酸铵则可沉淀包括血浆清蛋白在内的全部蛋白质。

分段盐析原理

蛋白质是亲水胶体，借水化膜和同性电荷（在PH值7.0的溶液中一般蛋白质带负电荷）维持胶体的稳定性。向蛋白质溶液中加入某种碱金属或碱土金属的中性盐类,则发生电荷中和现象（失去电荷）。当盐类的浓度足够大时，蛋白质胶粒脱水而沉淀，称为盐析。由盐析所得的顼沉淀，经过透析或用水稀释以减低或除去盐后，能再溶解并恢复其分子原有结构及生物活性，因此由盐析生成的沉淀是可逆性沉淀。各种蛋白质分子颗粒大小、亲水度不同，故盐析所需耍的盐浓度也不一样。调节混合蛋白质溶液中盐的浓度.可使各种蛋白质分段沉淀。球蛋白在个饱和硫酸铵溶液中即可析出，白蛋白则需在饱和硫酸铵溶液中才能沉淀，此法是蛋白质分离纯化过程中的常用方法。

蛋白质的分子很大，其颗粒在胶体颗粒范围（直径1~100nm）内，所以不能透过半透膜。选孔径合宜的半透膜，由于小分子物质能够透过，而蛋白质颗粒不能透过，因此可使蛋白质和小分子物质分开。这种方法可除去和蛋白质混合的中性盐及其他小分子物质。这种技术叫做透析，是常用来纯化蛋白质的方法。由盐析所得的蛋白质沉淀，经过透析脱盐后仍可恢复其原有结构及生物活性。

分段盐析操作步骤

1. 分段盐析的条件先需要进行小实验探索，如：先进行0%-30%的硫酸铵沉淀，再进行30%-60%的硫酸铵沉淀，最后进行60%-80%的硫酸铵沉淀。

2. 每一段盐析静置之后都将离心取沉淀，透析并检测活性。通过实验结果可以看出哪一段盐析出来的目的产物最多，相对来说杂质就更少。

3. 比如实验中的活性物质主要在60%-80%这段出来，在以后的实验中，就可以首先进行0%-60%的硫酸铵沉淀，这段沉淀物可以抛弃（去除大多数杂质）；然后进行60%-80%的硫酸铵沉淀，这段沉淀出来是物质是所需要的目的物质含量比较高的物质，将其收集进行下一步纯化工作 。