破骨细胞空泡ATP酶V0结构域e1亚单位的转录调控机制研究

《破骨细胞空泡ATP酶V0结构域e1亚单位的转录调控机制研究》是依托上海交通大学，由应华担任项目负责人的青年科学基金项目。

破骨细胞空泡ATP酶V0结构域e1亚单位的转录调控机制研究项目摘要

骨骼是由成骨细胞、破骨细胞及骨细胞共同精确调控的，处于动态平衡的器官。若平衡被打破，则可表现为骨质疏松、骨硬化等疾病。破骨细胞数量增多或活性增强是导致骨质疏松的直接原因。空泡ATP酶作为破骨细胞唯一的泌酸机制，对破骨细胞骨吸关键作用。近年来，申请者针对破骨细胞空泡ATP酶V0结构域e1亚单位，构建了破骨细胞特异的e1亚单位基因敲除小鼠，通过系统研究基因敲除小鼠的骨骼表型、破骨细胞功能，揭示了e1亚单位在破骨细胞空泡ATP酶介导的骨吸收过程中的生物学功能。然而，作为破骨细胞空泡ATP酶重要亚单位之一，其转录调控机制有待发掘。前期试验中，申请者证实e1亚单位在破骨细胞分化过程中表达大幅上调。在此基础上，本研究将采用药物抑制、逆转录病毒转染、荧光素酶筛选、计算机模拟预测、构建点突变质粒等分子生物学手段，旨在阐明破骨细胞分化过程中e1亚单位转录调控机制，以期为溶骨性疾病的治疗开拓新思路。

破骨细胞空泡ATP酶V0结构域e1亚单位的转录调控机制研究结题摘要

骨骼是由成骨细胞、破骨细胞及骨细胞共同精确调控的，处于动态平衡的器官。若平衡被打破，则可表现为骨质疏松、骨硬化等疾病。破骨细胞数量增多或活性增强是导致骨质疏松的直接原因。空泡ATP酶作为破骨细胞唯一的泌酸机制，对破骨细胞骨吸关键作用。作为破骨细胞空泡ATP酶重要亚单位之一，v0结构域e1亚单位的表达调控机制有待发掘。通过本项目的研究，我们利用药物抑制、基因沉默、PCR、免疫电泳、免疫共沉淀、体外细胞测试、免疫荧光-共聚焦显像、微型CT等手段，证明巨噬细胞迁移抑制因子与cAMP 反应原件结合蛋白共同调控破骨细胞的分化，为溶骨性疾病的治疗开拓新思路。同时我们还通过共聚焦显微镜记录破骨细胞在不同环境中形态变化，结合RNA测序，推导极化状态、多核分布对细胞功能的可能影响，为进一步理解破骨细胞生理功能进行了有益的探索。